Rođena kao Jennifer Joanne Linn Anastasakis, kćer je poznatog američkog glumca Johna Anistona  i spisateljice Nancy Aniston. Majka joj je talijansko-škotskog  porijekla, a otac grčkog.

Aniston se pojavila kao “Nutri System” djevojka u radijskom showu Howarda Sterna  u kasnim 80-ima i ranim 90-ima. Preselila se u Hollywood  i dobila je prvu televizijsku ulogu u seriji kratkog vijeka, “Molloy”, a potom ulogu u filmu “Camp Cucamonga”. Također je igrala lik sestre u TV seriji “Ferris Bueller”, televizijskoj adaptaciji poznatog hita iz 1986. “Slobodan dan Ferrisa Buellera”. Serija je ubrzo bila otkazana. Nakon još dva propala showa, Aniston je polako počela odustajati od glume.

No, planovi su joj se promjenili kada je krenula na audiciju za tada novu, humorističnu seriju “Prijatelji” (Friends), koja je trebala s emitiranjem krenuti u sezoni 1994./1995. Producenti showa su ipak htjeli vidjeti Jennifer u ulozi Monice Geller, no Jennifer je bila uporna i uvjerila ih kako je lik Rachel Green napisan za nju. Dobila je ulogu Rachel, te ju je igrala punih 10 godina, od 1994.-2004. Serija je bila poznata po cijelom svijetu, te je čak i frizura poznata kao “Rachel” bila tražena u frizerskim salonima.